비타민 D (D2/D3) HPLC-UV/PDA/FL

건강기능식품의 기준 및 규격 제4. 3-3 비타민 D

컬럼: [LC/UV 컬럼스위칭] 전처리칼럼: Capcellpak MF C8 SG80(안지름 4.6 mm, 길이 150 mm, 5 μm), 농축칼럼: Capcellpak C18 UG 120V(안지름 2.0 mm, 길이 35 mm, 5 μm), 분석칼럼: Cadenza CD-C18(안지름 1.5 mm, 길이 250 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것 (육방전환밸브시스템 사용) / [LC-MS 대안] ACQUITY UPLC® BEH(안지름 2.1 mm, 길이 100 mm, 충전입자크기 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것
이동상: [LC/UV] 전처리칼럼: 80%(v/v) 메탄올, 분석칼럼: 96%(v/v) 메탄올 / [LC-MS 대안] 5 mM 초산암모늄 : 메탄올 (5 : 95)
유속: [LC/UV] 전처리칼럼 300 μL/분, 분석칼럼 90 μL/분 / [LC-MS 대안] 0.45 mL/분
검출: [LC/UV] 자외부흡광광도검출기 264 nm / [LC-MS 대안] 질량분석기(MS)
주입량: [LC/UV] 100 μL / [LC-MS 대안] 1 μL
컬럼온도: [LC/UV] 35℃ / [LC-MS 대안] 40℃
이온화: ESI, positive (LC-MS 대안 조건, 표 2)
MS 조건: Monitoring ion — 비타민 D2 : 397 → 107, 105, 91 / 비타민 D3 : 385 → 107, 105, 79 (원문 표 2. 텍스트 추출 과정에서 D2·D3 아래첨자가 소실되어 있으나 분자량 396.65[D2]·384.64[D3] 기준의 [M+H]+와 일치)
대상 화합물: 2종 동시분석

note 병기용: LC-MS. 주된 정량법은 액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출기(264 nm, 표 1)이며, 액체크로마토그래프/질량분석기(표 2)는 동등한 대안 정량법으로 계산식이 공통이다. LC-MS 부가조건: Capillary Voltage 3.5 kV, Source Temp. 120℃, Desolvation Temp. 350℃. 표준물질 2종: Ergocalciferol(비타민 D2, C28H44O, 분자량 396.65, CAS 50-14-6), Cholecalciferol(비타민 D3, C27H44O, 분자량 384.64, CAS 67-97-0). 전처리: 검체 0.1~1 g에 피로갈롤:에탄올(1→10) 40 mL와 90% 수산화칼륨 10 mL를 가해 수욕 30분 비누화 → 헥산 50 mL로 3회 추출 → 1 N/0.5 N 수산화칼륨 및 물로 세척(페놀프탈레인 알칼리반응 소실까지) → 무수황산나트륨 탈수 후 40℃ 이하 감압농축 → 메탄올 5 mL 재용해·멤브레인 여과. 계산: 함량(μg/100 g) = C × (a × b) / S × 100, D2·D3를 구분하여 계산, 비타민 D 1 μg = 40 IU. 정량한계는 원문 미명시.

출처: 건강기능식품공전 · 식약처고시 제2026-43호 (시행 2026.6.11. 시행) · 원문 보기

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