공전·공정시험법 DB › 사료공정(사료표준분석방법)
비타민 D HPLC-UV/PDA/FL
사료표준분석방법 6장. 비타민 6.8. 비타민 D
- 컬럼
- 2단 분석. 1단계(분취용): 역상형 칼럼 (7.8 × 300 mm, 15～20 μm) / 2단계(정량용): 순상형 칼럼 (4.6 × 250 mm, 5 μm)
- 이동상
- 1단계: 아세토니트릴 · 메탄올 (1 : 1) / 2단계: 0.4% 이소프로판올·헥산용액 (양 단계 모두 isocratic)
- 유속
- 1단계 2.0 mL/분 / 2단계 1.6 mL/분
- 검출
- 자외부검출기(UV photometric detector), 파장 254 nm (1·2단계 공통)
- 주입량
- 1단계 200 μL / 2단계 100 μL
- 컬럼온도
- 1단계 35℃ / 2단계 35℃
2단(heart-cut) 분석법. 1단계에서 분획포집기로 비타민 D 획분을 분취(피크 도달 전후 30초)하고, 감압농축 후 0.4% 이소프로판올·헥산 200 μL에 녹여 100 μL를 2단계에 주입. 전처리: 비타민 D 2 IU(0.05 μg) 이상 함유 시료에 피로갈롤-에탄올 용액 40 mL, 90% KOH 10 mL를 가해 수욕 30분 비누화 → 헥산 100 mL 추출 → 1 N KOH 100 mL, 0.5 N KOH 40 mL, 물 40 mL로 4회 세척 → 헥산층 80 mL를 40℃ 이하 감압농축 → 헥산 5 mL에 녹여 4.5 mL를 재농축 → 아세토니트릴:메탄올(1:1) 500 μL로 정용. 머무름시간 — 1단계 D2 14.10분/D3 15.03분, 2단계 D2 20.20분/D3 12.97분. 비타민 D2와 D3를 구분하여 계산. 정량한계 원문 미명시.
출처: 사료공정(사료표준분석방법) · 농림축산식품부 공고 제2025-312호 (시행 2025.7.10. 공고 (사료표준분석방법 2025.6판)) · 원문 보기
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