Hyaluronic acid(히알루론산) HPLC-UV/PDA/FL

표준물질 : Hyaluronic acid sodium salt, 분자량 401.3, CAS No. 9067-32-7. 원리 : 시료에서 추출한 히알루론산을 콘드로이티나아제 ABC로 특이 분해해 생성된 불포화 이당류를 음이온교환칼럼으로 232 nm에서 정량. 시액 : 33 mM Tris-HCl 완충용액(트리스염 3.99 g + 아세트산나트륨 2.7 g을 증류수 900 mL에 녹이고 염산으로 pH 6.8 조정 후 1 L). 전처리 : 히알루론산으로서 0.5~5 mg이 함유되도록 시료를 취해 33 mM Tris-HCl 완충용액으로 50 mL 정용, 마그네틱 바로 60℃ 90분 강하게 추출 후 실온 냉각. 효소반응 : 추출액 50 μL + 0.002 unit/μL 콘드로이티나아제 ABC 50 μL + 33 mM Tris-HCl(pH 6.8) 400 μL를 37℃ 3시간 반응, 100℃ 5분 가열 후 0.45 μm 여과(표준용액도 동일 처리). 함량(mg/g) = C × (a × b)/S × 1/1,000 × 378.3/401.3 (378.3 : 히알루론산 이당류, 401.3 : 히알루론산 나트륨 이당류 분자량). 정량한계·기준값 원문 미명시.