Isoflavone(이소플라본)(대두이소플라본, 제2법 — 아세틸·말로닐 염기가수분해) HPLC-UV/PDA/FL

건강기능식품의 기준 및 규격 제4. 3-53 대두이소플라본 / 3-53-2 이소플라본(제2법)

컬럼: [LC/UV] 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 250 mm, 충전제 octadecyl silica, 충전입자크기 5 μm) 또는 이와 동등한 것 / [LC-MS/MS] 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 2.1 mm, 길이 100 mm, 충전제 octadecyl silica, 충전입자크기 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것
이동상: [LC/UV, 표1] A: 0.1% 초산용액, B: 0.1% 초산을 함유한 메탄올 / 그래디언트 — 0분 A80:B20, 15분 A50:B50, 25분 A30:B70, 30분 A80:B20. [LC-MS/MS, 표2] A: 0.1% 개미산용액, B: 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 / 그래디언트 — 0분 A95:B5, 5.0분 A5:B95, 5.5분 A95:B5, 6.0분 A95:B5
유속: [LC/UV] 1.0 mL/분 / [LC-MS/MS] 0.3 mL/분
검출: [주된 정량법] 자외부흡광광도검출기(UV Detector) 260 nm / [동등 대안] 질량검출기(MS/MS), MRM
주입량: [LC/UV] 5 μL / [LC-MS/MS] 2 μL
컬럼온도: [LC/UV] 40 ℃ / [LC-MS/MS] 40 ℃
이온화: [LC-MS/MS] ESI, positive (Capillary Voltage 3.5 kV, Source Temp. 120℃, Desolvation Temp. 350℃)
MS 조건: [표3] Daidzin 417→255; Glycitin 447→285; Genistin 433→271; Daidzein 255→199, 137; Glycitein 285→242, 270; Genistein 271→153, 149 (제2법 표3에는 Cone 전압 미기재)
대상 화합물: 6종 동시분석

시료에 존재하는 아세틸·말로닐 이소플라본을 염기성 가수분해로 아세틸기·말로닐기가 제거된 이소플라본으로 전환시켜 함께 정량하는 방법. 측정 대상 6종: 다이드진, 글리시틴, 제니스틴(배당체), 다이드제인, 제니스테인, 글리시테인(비배당체). 표준용액: 각 50 mg/50 mL — 배당체는 메탄올, 비배당체는 디메틸설폭시드(DMSO) 용해 후 메탄올 희석(0.1~80 μg/mL). 전처리(분말형): 시료를 50 mL 부피플라스크에 정밀히 취해 80% 메탄올 40 mL로 30분 초음파 추출 → 2 M 수산화나트륨용액 3 mL 첨가 후 상온 10분 회전교반(염기가수분해) → 초산 1 mL 첨가 후 80% 메탄올로 50 mL 정용 → 0.45 μm 여과. 유지형제품은 클로로포름 2 mL로 분산 후 동일 처리. UV 260 nm가 주된 정량법이고 LC-MS/MS는 동등 대안 정량법. 배당체는 1/1.6(0.625) 전환계수 적용. 정량한계는 원문 미명시.

출처: 건강기능식품공전 · 식약처고시 제2026-43호 (시행 2026.6.11. 시행) · 원문 보기

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